上一期胃类器官干货文章中，我们整理iPSC/ESC来源的胃类器官培养方法，其过程相对复杂，而成体干细胞来源的胃类器官培养则相对简单，本期小恒为大家整理了小鼠成体干细胞来源的胃类器官的建立过程，供大家参考学习。

图1. 成体干细胞来源的胃类器官培养[1]

1. 组织获取与处理

1.1 组织获取

可直接取自小鼠胃部，沿胃大弯打开，用冰冷的DPBS冲洗。在解剖显微镜下，使用解剖剪刀和镊子小心去除胃底或胃窦组织的浆膜肌肉。

图2. 小鼠胃底和胃窦夹层处理

1.2 细胞分离

（1）将处理后的组织切成小于5mm2的小块，放入含Ca2+/Mg2+ 的DPBS中，加入5 mM EDTA，在4°C条件下振荡孵育2小时。

（2）将组织转移至解离缓冲液中，手工剧烈振荡2分钟，再用1mL移液器进行机械解离。

（3）将含有解离组织的培养基在150 g离心力下离心5分钟，弃去上清液，收集细胞沉淀。

1.3 建立培养体系

（1）将沉淀细胞重悬于Matrigel中，按照50μl每孔的量加入到12 孔板中。

（2）在 37°C 条件下使Matrigel固化，随后添加胃类器官生长培养基（DMEM/F12、50% Wnt、10% R-spondin、10nM [Leu15] - Gastrin I、100ng/ml FGF10、50ng/ml EGF10、100ng/ml Noggin和10nM Y-27632（仅初始 4 天添加）等）。

（3）每 4 天更换一次培养基。

1.4 两种培养模型

1.4.1 模型1（维持干细胞扩增）

（1）每 12 天对胃类器官进行传代培养。

（2）用冰冷的DPBS将胃类器官从Matrigel中取出，通过26G针头破碎，然后在150g 离心力下离心5分钟，收集细胞沉淀。

（3）将沉淀重悬于Matrigel中，添加生长培养基继续培养即可。

1.4.2 模型2（维持分化成熟细胞）

（1）采用Transwell系统，将胃类器官与永生化胃间质细胞（ISMCs）共培养。

（2）将胃类器官在Matrigel中培养，放置于Transwell小室的上层，在小室上下层均添加胃类器官培养基。

（3）在培养第4天，将ISMCs 接种于孔板底部，然后将含有胃类器官的Transwell小室转移至该孔中。

（4）每2天更换一次培养基和ISMCs，在培养第10 - 12天收获胃类器官。

图3. 两种胃类器官模型建立

以上便是关于小鼠成体干细胞来源的胃类器官的培养过程，主要参考“The use of murine-derived fundic organoids in studies of gastric physiology”一文进行总结整理，更多的细节内容大家可以再详细查阅文献，以及有什么经验也可以在评论区分享交流。小恒后续将继续带来不同类器官的干货，欢迎大家持续关注！

参考文献：

[1] Pang MJ, Burclaff JR, Jin R, et al. Gastric Organoids: Progress and Remaining Challenges. Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 2022;13(1):19-33.

[2] Schumacher MA, Aihara E, Feng R, et al. The use of murine-derived fundic organoids in studies of gastric physiology. J Physiol. 2015;593(8):1809-1827.